Нормативные документы
Канцерогенность и мутагенность новых лекарственных средств изучается в соответствии с рекомендациями руководства по доклиническим испытаниям новых лекарственных средств (Миронов..2012), а также зарубежных протоколов OECD:
- OECD No.474: Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test;
- OECD No.471: Bacterial Reverse Mutation Test;
- OECD No.478: Rodent Dominant Lethal test.
Основные методы изучения
Микроядерный тест является общепринятым цитогенетическим методом оценки мутагенных свойств и канцерогенных свойств агентов различной природы. Оценка содержания микроядер производится визуально с использованием красителя акридинового оранжевого, который связывается с ДНК клеток. В приготовленных препаратах оценивается соотношение незрелых эритроцитов (полихроматофилов, ПХЭ) к общему количеству зрелых эритроцитов (нормохроматофилов, НХЭ) в процентах (%) на каждое экспериментальное животное, количество НХЭ с микроядром и ПХЭ с микроядром.
Тест Эймса является классическим методом для оценки генотоксичности лекарственных средств и субстанций. Принцип метода основан на выращивании мутантных ауксотрофных бактериальных клеток Salmonella typhimurium штаммов TA98 и TA100, TA1535 и TA1537 в присутствии исследуемого вещества. Имеется большое количество модификаций теста Эймса. В тестах Эймса в микропланшете используется колориметрический индикатор, который визуально позволяет определить наличие мутаций.
Доминантные летальные мутации – это генетические изменения, индуцированные в родительских зародышевых клетках и приводящие к гибели первое поколение потомков на эмбриональных стадиях развития. Общая схема эксперимента включает в себя обработку самцов грызунов исследуемым веществом и последующим спариванием их с интактными виргинными самками. Спустя определенное время после спаривания самок эвтаназируют, вскрывают матку и определяют количество живых и мертвых эмбрионов, производят сравнение с контрольной группой.
Указанный набор методов является минимальным, чтобы оценить мутагенность и канцерогенность новых субстанций и лекарственных средств. В случае выявления положительных результатов в одном из тестов необходимы дополнительные исследования.